{"id":26418,"date":"2022-05-07T15:26:01","date_gmt":"2022-05-07T07:26:01","guid":{"rendered":"https:\/\/www.accscicn.com\/?p=26418"},"modified":"2022-10-26T15:46:26","modified_gmt":"2022-10-26T07:46:26","slug":"fluorescence-lifetime-detection","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.accscicn.com\/es\/vision\/aplicacion\/deteccion-del-tiempo-de-vida-de-la-fluorescencia\/","title":{"rendered":"Algunas cuestiones clave en las pruebas de duraci\u00f3n de la fluorescencia"},"content":{"rendered":"<div data-elementor-type=\"wp-post\" data-elementor-id=\"26418\" class=\"elementor elementor-26418\" data-elementor-post-type=\"post\">\n\t\t\t\t\t\t<section class=\"elementor-section elementor-top-section elementor-element elementor-element-4ba6d753 elementor-section-full_width elementor-section-stretched elementor-section-height-default elementor-section-height-default\" data-id=\"4ba6d753\" data-element_type=\"section\" data-settings=\"{&quot;stretch_section&quot;:&quot;section-stretched&quot;,&quot;background_background&quot;:&quot;classic&quot;}\">\n\t\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-container elementor-column-gap-default\">\n\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-column elementor-col-100 elementor-top-column elementor-element elementor-element-2d7b9e2\" data-id=\"2d7b9e2\" data-element_type=\"column\">\n\t\t\t<div class=\"elementor-widget-wrap elementor-element-populated\">\n\t\t\t\t\t\t<section class=\"elementor-section elementor-inner-section elementor-element elementor-element-13ce76d5 elementor-section-boxed elementor-section-height-default elementor-section-height-default\" data-id=\"13ce76d5\" data-element_type=\"section\">\n\t\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-container elementor-column-gap-default\">\n\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-column elementor-col-50 elementor-inner-column elementor-element elementor-element-5da7823a\" data-id=\"5da7823a\" data-element_type=\"column\">\n\t\t\t<div class=\"elementor-widget-wrap elementor-element-populated\">\n\t\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-element elementor-element-33a1dfbc elementor-widget elementor-widget-heading\" data-id=\"33a1dfbc\" data-element_type=\"widget\" data-widget_type=\"heading.default\">\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-widget-container\">\n\t\t\t<style>\/*! elementor - v3.21.0 - 20-05-2024 *\/\n.elementor-heading-title{padding:0;margin:0;line-height:1}.elementor-widget-heading .elementor-heading-title[class*=elementor-size-]>a{color:inherit;font-size:inherit;line-height:inherit}.elementor-widget-heading .elementor-heading-title.elementor-size-small{font-size:15px}.elementor-widget-heading .elementor-heading-title.elementor-size-medium{font-size:19px}.elementor-widget-heading .elementor-heading-title.elementor-size-large{font-size:29px}.elementor-widget-heading .elementor-heading-title.elementor-size-xl{font-size:39px}.elementor-widget-heading .elementor-heading-title.elementor-size-xxl{font-size:59px}<\/style><h1 class=\"elementor-heading-title elementor-size-default\"><b>Algunas cuestiones clave en las pruebas de duraci\u00f3n de la fluorescencia<\/b><\/h1>\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-element elementor-element-37d278e3 elementor-widget elementor-widget-text-editor\" data-id=\"37d278e3\" data-element_type=\"widget\" data-widget_type=\"text-editor.default\">\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-widget-container\">\n\t\t\t<style>\/*! elementor - v3.21.0 - 20-05-2024 *\/\n.elementor-widget-text-editor.elementor-drop-cap-view-stacked .elementor-drop-cap{background-color:#69727d;color:#fff}.elementor-widget-text-editor.elementor-drop-cap-view-framed .elementor-drop-cap{color:#69727d;border:3px solid;background-color:transparent}.elementor-widget-text-editor:not(.elementor-drop-cap-view-default) .elementor-drop-cap{margin-top:8px}.elementor-widget-text-editor:not(.elementor-drop-cap-view-default) .elementor-drop-cap-letter{width:1em;height:1em}.elementor-widget-text-editor .elementor-drop-cap{float:left;text-align:center;line-height:1;font-size:50px}.elementor-widget-text-editor .elementor-drop-cap-letter{display:inline-block}<\/style>\t\t\t\t<p><strong>Jin Shengye, Instituto de F\u00edsica Qu\u00edmica de Dalian, Academia China de Ciencias<\/strong><\/p><p>La detecci\u00f3n del tiempo de vida de la fluorescencia es una de las t\u00e9cnicas m\u00e1s utilizadas para determinar el tiempo de vida del estado excitado y la cin\u00e9tica del portador de una sustancia. La selecci\u00f3n y el uso correctos de las t\u00e9cnicas de detecci\u00f3n del tiempo de vida de la fluorescencia y la adquisici\u00f3n y el an\u00e1lisis correctos de la cin\u00e9tica del tiempo de vida de la fluorescencia son de especial importancia para determinar las propiedades del estado excitado de las sustancias, las propiedades de los materiales y la cin\u00e9tica de los portadores. En el pasado, a menudo hemos encontrado conceptos err\u00f3neos y malentendidos en los par\u00e1metros t\u00e9cnicos y el an\u00e1lisis cin\u00e9tico de los equipos de detecci\u00f3n del tiempo de vida de fluorescencia, que han llevado a juicios equivocados de las propiedades cin\u00e9ticas del portador de los materiales en estudio. Por lo tanto, nos gustar\u00eda presentar en este breve art\u00edculo una breve visi\u00f3n general del significado f\u00edsico y la comprensi\u00f3n cin\u00e9tica de algunos par\u00e1metros t\u00e9cnicos importantes de los dispositivos de fluorescencia.<\/p><p>\u00a0<\/p><p>01<strong>Principios b\u00e1sicos de la vida \u00fatil de la fluorescencia<\/strong><\/p><p>La fluorescencia es la absorci\u00f3n de fotones excitados en materiales luminiscentes tras la aparici\u00f3n de saltos de electrones en orbitales de nivel de energ\u00eda, lo que da lugar a especies de estado excitado (como excitones, cargas libres, etc.) mediante el proceso de composici\u00f3n de radiaci\u00f3n emitido por fotones. La fluorescencia encarna el proceso por el cual un material cambia de un estado b\u00e1sico a un estado excitado y posteriormente decae de nuevo al estado b\u00e1sico, y su tiempo de vida de fluorescencia refleja el tiempo de vida del estado excitado del material. Ilustramos este proceso con la mol\u00e9cula C como ejemplo:<\/p><p><strong><img fetchpriority=\"high\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26435\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640.png\" alt=\"\" width=\"798\" height=\"243\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640.png 798w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-300x91.png 300w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-768x234.png 768w\" sizes=\"(max-width: 798px) 100vw, 798px\" \/><\/strong><\/p><p>La mol\u00e9cula C en estado b\u00e1sico absorbe un fot\u00f3n excitado y pasa al estado excitado C*, que es el estado excitado C<em>puede decaer de nuevo al estado b\u00e1sico por la v\u00eda de la radioluminiscencia (kr) o por la v\u00eda de la no radioluminiscencia (knr). Seg\u00fan la ecuaci\u00f3n de velocidad de reacci\u00f3n primaria, en el momento t tras la excitaci\u00f3n, C<\/em>La velocidad de decaimiento de<\/p><p><strong><img decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26420\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-1.png\" alt=\"\" width=\"386\" height=\"66\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-1.png 386w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-1-300x51.png 300w\" sizes=\"(max-width: 386px) 100vw, 386px\" \/><\/strong><\/p><p>La integraci\u00f3n en el tiempo da la concentraci\u00f3n de C* en el momento t como<\/p><p><strong><img decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26421\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-2.png\" alt=\"\" width=\"402\" height=\"60\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-2.png 402w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-2-300x45.png 300w\" sizes=\"(max-width: 402px) 100vw, 402px\" \/><\/strong><\/p><p>donde C0* es la concentraci\u00f3n total de estados excitados en el momento t=0 (es decir, la concentraci\u00f3n total de estados excitados producidos por la excitaci\u00f3n) y k0= kr + knr.<\/p><p>En los experimentos de detecci\u00f3n del tiempo de vida de la fluorescencia, el detector detecta la intensidad de luminiscencia por unidad de tiempo, es decir, la tasa de luminiscencia de la muestra, d(fot\u00f3n)\/dt, as\u00ed:<\/p><p><strong><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26422\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-3.png\" alt=\"\" width=\"537\" height=\"68\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-3.png 537w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-3-300x38.png 300w\" sizes=\"(max-width: 537px) 100vw, 537px\" \/><\/strong><\/p><p>En un proceso de detecci\u00f3n realista (por ejemplo, utilizando t\u00e9cnicas de recuento de fotones individuales correlacionados en el tiempo (TCSPC)), el detector determina realmente la tasa de luminiscencia recogiendo el n\u00famero de fotones (\u0394P) durante un peque\u00f1o periodo de tiempo (bin time, \u0394t), cuando \u0394t es suficientemente peque\u00f1o:<\/p><p><strong><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26423\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-4.png\" alt=\"\" width=\"663\" height=\"55\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-4.png 663w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-4-300x25.png 300w\" sizes=\"(max-width: 663px) 100vw, 663px\" \/><\/strong><\/p><p>La curva de vida de fluorescencia obtenida experimentalmente puede verse en la Figura 1.<\/p><p><strong><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26424\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-5.png\" alt=\"\" width=\"600\" height=\"403\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-5.png 600w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-5-300x202.png 300w\" sizes=\"(max-width: 600px) 100vw, 600px\" \/><\/strong><\/p><p>Figura 1. Diagrama esquem\u00e1tico de una curva t\u00edpica de vida de fluorescencia<\/p><p>La curva completa del tiempo de vida de la fluorescencia se compone de valores \u0394P en intervalos sucesivos \u0394t (bin time) y consta principalmente de un flanco ascendente (formaci\u00f3n del estado excitado) y un flanco descendente (decaimiento del estado excitado). El flanco ascendente viene determinado por el mecanismo de excitaci\u00f3n (por ejemplo, excitaci\u00f3n directa o transferencia de energ\u00eda) y la IRF (funci\u00f3n de respuesta del instrumento). La IRF del instrumento determina la resoluci\u00f3n temporal de la detecci\u00f3n del tiempo de vida de fluorescencia, como explicaremos m\u00e1s adelante. El componente de decaimiento del tiempo de vida de fluorescencia puede expresarse mediante la ecuaci\u00f3n (4). Ajustando exponencialmente la curva de decaimiento, se obtiene la constante de velocidad de decaimiento de fluorescencia k0 o el tiempo de vida de fluorescencia \u03c40 = 1\/k0 para la muestra.** De ello se deduce que el tiempo de vida de fluorescencia \u03c40 obtenido en la detecci\u00f3n del tiempo de vida de fluorescencia es la suma de las constantes de velocidad de todos los canales de decaimiento (tanto radiativo como no radiativo) en el estado excitado y no s\u00f3lo la constante de velocidad del complejo de radiaci\u00f3n detectado.<em>Tambi\u00e9n el A0 en el ajuste de la curva de desintegraci\u00f3n es el valor \u0394p (n\u00famero de fotones) medido en el laboratorio en el momento t = 0. Por la ecuaci\u00f3n (4) se puede deducir que A0 debe ser A0 = krC0<\/em> (Aqu\u00ed no se considera la eficiencia de detecci\u00f3n de fotones del detector). Para la muestra de ensayo seleccionada, kr (la tasa de complejo de radiaci\u00f3n) puede considerarse una constante en condiciones estables, de modo que A0 en la curva de decaimiento puede considerarse proporcional a C0, la concentraci\u00f3n total de estados excitados en la muestra con la constante de decaimiento k0 caracter\u00edstica.<\/p><p>En la descripci\u00f3n esquem\u00e1tica anterior, hemos utilizado como ejemplo la ecuaci\u00f3n de decaimiento exponencial simple. Sin embargo, en la pr\u00e1ctica, la mayor\u00eda de las muestras muestran un proceso de decaimiento exponencial doble o incluso triple. Creo que la existencia de procesos de decaimiento multiexponencial se debe a la naturaleza no homog\u00e9nea de las muestras tanto a escala espacial como temporal. La no homogeneidad espacial se refiere a las diferencias entre los numerosos individuos luminosos (por ejemplo, mol\u00e9culas individuales o nanopart\u00edculas individuales) contenidos en una muestra macrosc\u00f3pica (los propios individuos o su entorno microsc\u00f3pico). Para un solo individuo luminiscente de una muestra, el entorno microsc\u00f3pico en el que se encuentra puede ser muy diferente, por ejemplo, la distribuci\u00f3n de los estados de defecto no es uniforme, la temperatura no es uniforme, la interfaz de superficie no es uniforme, etc., lo que da lugar a que el k0 de los individuos luminiscentes de la muestra no sea exactamente el mismo, sino que existe una distribuci\u00f3n, de modo que la curva de tiempo de vida de fluorescencia de la muestra macrosc\u00f3pica refleja el proceso de decaimiento multiexponencial tras la media de muchos individuos. Adem\u00e1s, durante el proceso de adquisici\u00f3n del tiempo de vida de fluorescencia, las fluctuaciones en las condiciones ambientales o la ocurrencia de ciertos procesos f\u00edsicos tambi\u00e9n pueden causar que la muestra muestre diferentes tiempos de vida de fluorescencia en diferentes momentos de adquisici\u00f3n, dando como resultado que la curva final del tiempo de vida de fluorescencia muestre un proceso multiexponencial. Ajustando la ecuaci\u00f3n multiexponencial de la Ec. (5), podemos derivar los valores del tiempo de vida de fluorescencia (k1, k2 ...) de los diferentes componentes del tiempo de vida de fluorescencia y la contribuci\u00f3n de cada componente a la curva global del tiempo de vida (A1, A2 ...) como sigue:<\/p><p><strong><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26425\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-6.png\" alt=\"\" width=\"622\" height=\"49\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-6.png 622w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-6-300x24.png 300w\" sizes=\"(max-width: 622px) 100vw, 622px\" \/><\/strong><\/p><p>Adem\u00e1s, la descripci\u00f3n anterior se hace en t\u00e9rminos de una reacci\u00f3n primaria (\u00edndice e), tratando la especie de estado excitado como un todo (por ejemplo, un \u00fanico estado lineal o un excit\u00f3n). Si la luminiscencia es producida por un complejo de electrones y huecos libres, la curva de decaimiento del tiempo de vida de la fluorescencia debe expresarse en t\u00e9rminos de la reacci\u00f3n de segundo orden (exponente de potencia), es decir<\/p><p><strong><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26426\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-7.png\" alt=\"\" width=\"659\" height=\"36\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-7.png 659w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-7-300x16.png 300w\" sizes=\"(max-width: 659px) 100vw, 659px\" \/><\/strong><\/p><p>Los procesos cin\u00e9ticos son complejos, por lo que se recomienda consultar la bibliograf\u00eda correspondiente para los estudios relacionados, que no se describir\u00e1n aqu\u00ed.<\/p><p>\u00a0<\/p><p>02<strong>Principios t\u00e9cnicos de la detecci\u00f3n de la vida \u00fatil de la fluorescencia<\/strong><\/p><p>El recuento de fotones individuales correlacionados en el tiempo (TCSPC) es el m\u00e9todo de ensayo de la vida \u00fatil de fluorescencia m\u00e1s utilizado en la actualidad. En primer lugar, debe quedar claro que la curva de vida de fluorescencia es el resultado de un gran n\u00famero de recuentos de fotones. Suponiendo que una muestra macrosc\u00f3pica (a granel) produzca 1000 estados excitados en una excitaci\u00f3n, si el detector registra la luminiscencia de estos 1000 estados excitados en diferentes tiempos de retardo tras la excitaci\u00f3n, se puede obtener la curva de vida de fluorescencia de la muestra. El TCSPC se basa en el concepto de estad\u00edstica de fot\u00f3n \u00fanico y consta de un l\u00e1ser pulsado, un detector de fotones de alta sensibilidad y una tarjeta TCSPC, cuyo principio puede verse en la figura 2. El pulso l\u00e1ser excita la muestra para producir un estado excitado, seguido de una emisi\u00f3n compleja de fotones fluorescentes en el tiempo t1 que es captada por el detector. El tiempo t1 es la diferencia de tiempo (microtiempo) entre la se\u00f1al del pulso l\u00e1ser y la se\u00f1al de fluorescencia registrada por el TCSPC para esa excitaci\u00f3n. Sin embargo, en la detecci\u00f3n TCSPC, no todos los pulsos l\u00e1ser pueden producir los fotones de fluorescencia que se van a recoger (limitado por factores como la eficiencia cu\u00e1ntica de la fluorescencia de la muestra y la eficiencia de adquisici\u00f3n del dispositivo, por ejemplo, el n\u00famero de fotones por unidad de tiempo (cuentas\/s) registrado por el detector suele ser 1-2 \u00f3rdenes de magnitud inferior a la refrecuencia l\u00e1ser), por lo que para registrar s\u00f3lo el microtiempo de la producci\u00f3n de fotones de fluorescencia (lo que ahorra mucha memoria), la tarjeta TCSPC registra los fotones de fluorescencia. La tarjeta TCSPC registra la diferencia de tiempo entre la se\u00f1al de fluorescencia y la siguiente se\u00f1al de pulso l\u00e1ser adyacente a ella (t1\u2032 en la Fig. 2) y, a continuaci\u00f3n, bas\u00e1ndose en el per\u00edodo de tiempo de pulso l\u00e1ser T (T se fija en la refrecuencia l\u00e1ser elegida), es posible obtener t1 = T - t'1. Los microtiempos del gran n\u00famero de fotones recogidos (t1, t2, t3 ...) se eval\u00faan entonces de la siguiente manera La curva del tiempo de vida de la fluorescencia se obtiene contando los microtiempos (t1, t2, t3 ...) del gran n\u00famero de fotones recogidos.<\/p><p><strong><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26427\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-8.png\" alt=\"\" width=\"883\" height=\"736\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-8.png 883w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-8-300x250.png 300w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-8-768x640.png 768w\" sizes=\"(max-width: 883px) 100vw, 883px\" \/><\/strong><\/p><p>Figura 2. Principio de detecci\u00f3n de la vida \u00fatil de la fluorescencia TCSPC<\/p><p>a: Principio del registro del tiempo de la tarjeta TCSPC; b: Recuento estad\u00edstico de los tiempos de fotones individuales para construir curvas de vida de fluorescencia; c: Diagrama esquem\u00e1tico de la estructura del instrumento de detecci\u00f3n de fluorescencia TCSPC.<\/p><p>Las estad\u00edsticas de microtiempo de los fotones de fluorescencia en la curva de tiempo de vida TCSPC se basan en el n\u00famero de canales. Si la ventana de tiempo de adquisici\u00f3n se establece en 100 ns y el n\u00famero de canales es 4096, el intervalo de puntos de tiempo en la curva de vida \u00fatil de fluorescencia es 100 ns\/4096 = 24,4 ps, que es el tiempo bin (\u2206t) en las figuras 1 y 2, y los puntos de tiempo del eje temporal en la curva de vida \u00fatil de fluorescencia son 0, 24,4, 48,8, 73,2 ---. La curva de vida de fluorescencia se construye contando el n\u00famero de fotones en cada intervalo \u2206t, bas\u00e1ndose en el microtiempo de cada fot\u00f3n. Basado en el principio de adquisici\u00f3n de TCSPC, este m\u00e9todo se puede utilizar generalmente con una alta resoluci\u00f3n temporal y es m\u00e1s adecuado para su uso a frecuencias de l\u00e1ser m\u00e1s altas. Cuando la frecuencia del l\u00e1ser es baja (por ejemplo, &lt; 1 KHz), el tiempo de vida de la fluorescencia se recoge de forma menos eficiente (menos fotones por unidad de tiempo).<strong>Es especialmente importante tener en cuenta que este tiempo \u2206t (bin time) no es la resoluci\u00f3n temporal de la sonda de tiempo de vida de fluorescencia, \u00a1sino que s\u00f3lo representa la precisi\u00f3n temporal de la tarjeta TCSPC!<\/strong><\/p><p>Adem\u00e1s, tambi\u00e9n existe el concepto de macrotiempo en los ensayos TCSPC, que es el tiempo en el que se registran los fotones fluorescentes en relaci\u00f3n con el inicio de la adquisici\u00f3n experimental, y es fundamentalmente diferente del microtiempo de fotones en el tiempo de vida de la fluorescencia. Las tarjetas TCSPC pueden detectar el microtiempo de fotones (diferencia de tiempo) con una precisi\u00f3n de &lt; 10 ps, mientras que el macrotiempo se registra normalmente con una precisi\u00f3n del orden de los microsegundos.<\/p><p>La estructura b\u00e1sica del instrumento de detecci\u00f3n de fluorescencia TCSPC basado en el principio anterior puede verse en la Figura 2c, que incluye principalmente componentes b\u00e1sicos como el l\u00e1ser, el detector y la tarjeta TCSPC. El l\u00e1ser y el detector emiten se\u00f1ales el\u00e9ctricas sincronizadas cuando emiten luz l\u00e1ser y detectan fotones, que son detectados por la tarjeta TCSPC, y el microtiempo y macrotiempo de cada fot\u00f3n fluorescente se obtienen y calculan para construir una curva de vida de fluorescencia.<\/p><p>En la adquisici\u00f3n del tiempo de vida de fluorescencia, tambi\u00e9n es frecuente observar que la curva del tiempo de vida de fluorescencia no comienza en 0 en la ventana temporal, sino que tiene un tiempo de retardo Td (como se muestra en la Figura 3). El tiempo de respuesta de la electr\u00f3nica y el tiempo de transmisi\u00f3n de la se\u00f1al el\u00e9ctrica en la l\u00ednea provocan una diferencia de tiempo inherente entre la se\u00f1al el\u00e9ctrica sincr\u00f3nica y la se\u00f1al \u00f3ptica real, lo que da lugar a un retraso en la ventana de tiempo de vida de fluorescencia. Este retraso no afecta a la adquisici\u00f3n del tiempo de vida de fluorescencia, pero reduce la utilizaci\u00f3n del intervalo de la ventana temporal. El tama\u00f1o del tiempo de retardo puede ajustarse cambiando la longitud de la l\u00ednea de transmisi\u00f3n el\u00e9ctrica o ajustando el par\u00e1metro de retardo el\u00e9ctrico.<\/p><p><strong><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26428\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-9.png\" alt=\"\" width=\"739\" height=\"346\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-9.png 739w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-9-300x140.png 300w\" sizes=\"(max-width: 739px) 100vw, 739px\" \/><\/strong><\/p><p>Figura 3. Retrasos en la adquisici\u00f3n del tiempo de vida de fluorescencia y sus causas<\/p><p>Adem\u00e1s de la t\u00e9cnica TCSPC, los tiempos de vida de fluorescencia tambi\u00e9n pueden adquirirse mediante osciloscopios. A diferencia de la TCSPC, en la que se registra como m\u00e1ximo un tiempo de fot\u00f3n para una excitaci\u00f3n de pulso \u00fanico, los osciloscopios pueden lograr una adquisici\u00f3n continua de alta velocidad de la intensidad de fluorescencia tras una excitaci\u00f3n de pulso \u00fanico para obtener curvas de tiempo de vida de fluorescencia, estando determinada la precisi\u00f3n del barrido temporal por el ancho de banda (obs\u00e9rvese que no por la frecuencia de muestreo) del osciloscopio. Por ejemplo, un osciloscopio con un ancho de banda de 500M puede lograr un barrido temporal de 2ns de precisi\u00f3n, muy por debajo del de un TCSPC, mientras que los osciloscopios de mayor ancho de banda (por ejemplo, por encima de GHz) son muy caros. Por lo tanto, debido a las limitaciones del ancho de banda, el m\u00e9todo del osciloscopio es adecuado sobre todo para muestras con largos tiempos de vida de la fluorescencia (por ejemplo, fosforescencia) y para la detecci\u00f3n en condiciones de baja refrecuencia del l\u00e1ser.<\/p><p>\u00a0<\/p><p>03<strong>Par\u00e1metros fundamentales en la detecci\u00f3n de la vida \u00fatil de la fluorescencia<\/strong><\/p><p>Para lograr una adquisici\u00f3n y un an\u00e1lisis precisos de los tiempos de vida de la fluorescencia, es necesario definir primero una serie de par\u00e1metros fundamentales en la detecci\u00f3n de fluorescencia, entre los que se incluyen principalmente la resoluci\u00f3n temporal, el intervalo de la ventana temporal y la precisi\u00f3n temporal.<\/p><p><strong>1) Resoluci\u00f3n temporal y funci\u00f3n de respuesta del instrumento (IRF)<\/strong><\/p><p>La resoluci\u00f3n temporal es el par\u00e1metro m\u00e1s importante en la tecnolog\u00eda de medici\u00f3n de la vida \u00fatil de la fluorescencia y viene determinada por la funci\u00f3n de respuesta global del instrumento (IRF) del sistema de detecci\u00f3n (incluidos el l\u00e1ser, el detector y la tarjeta TCSPC). **La IRF viene determinada por el tiempo de respuesta y la fluctuaci\u00f3n de la se\u00f1al el\u00e9ctrica del l\u00e1ser, el detector y la tarjeta TCSPC, as\u00ed como por la anchura de pulso del l\u00e1ser. En las tarjetas TCSPC, la precisi\u00f3n de temporizaci\u00f3n puede alcanzar &lt;10 ps, que suele ser mucho mayor que la de los l\u00e1seres y detectores. Por lo tanto, el IRF de los sistemas de detecci\u00f3n de fluorescencia TCSPC se deriva principalmente del l\u00e1ser y el detector.<\/p><p>En el caso de los l\u00e1seres, los principales factores que contribuyen a la IRF son la anchura de pulso del l\u00e1ser y la fluctuaci\u00f3n de la se\u00f1al el\u00e9ctrica s\u00edncrona, como se muestra en la figura 4. La anchura de pulso del l\u00e1ser es uno de los par\u00e1metros m\u00e1s importantes de un l\u00e1ser pulsado y se expresa mediante el valor FWHM (full width half maximum) de la dispersi\u00f3n del pulso en el tiempo (Figura 4). Adem\u00e1s, la tarjeta TCSPC adquiere la refrecuencia del l\u00e1ser y el tiempo de ciclo T mediante la adquisici\u00f3n de la se\u00f1al el\u00e9ctrica s\u00edncrona pulsada (SYNC) del l\u00e1ser, lo que introduce una fluctuaci\u00f3n de tiempo entre cada se\u00f1al el\u00e9ctrica pulsada, es decir, el periodo de pulso en la se\u00f1al el\u00e9ctrica no es un tiempo T preciso, sino T + tiempo de fluctuaci\u00f3n. Seg\u00fan el c\u00e1lculo del microtiempo de los fotones fluorescentes (t1, t2 en la Fig. 2) t1 = T - t'1, la fluctuaci\u00f3n en el tiempo T (aunque sea mucho menor que T) se traslada al tiempo t1 y contribuye as\u00ed a la funci\u00f3n correspondiente del instrumento.<\/p><p><strong><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26429\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-10.png\" alt=\"\" width=\"836\" height=\"313\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-10.png 836w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-10-300x112.png 300w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-10-768x288.png 768w\" sizes=\"(max-width: 836px) 100vw, 836px\" \/><\/strong><\/p><p>Figura 4. Contribuci\u00f3n del l\u00e1ser a la IRF, principalmente por la anchura del pulso l\u00e1ser y la fluctuaci\u00f3n temporal (jitter) de la se\u00f1al el\u00e9ctrica s\u00edncrona<\/p><p>Las anchuras de pulso de los l\u00e1seres utilizados actualmente en el sondeo TCSPC pueden elegirse entre fs, ps y ns. La fluctuaci\u00f3n de la se\u00f1al el\u00e9ctrica s\u00edncrona suele ser del orden de un centenar de ps. Cuando la anchura del pulso l\u00e1ser es mucho mayor que la fluctuaci\u00f3n (por ejemplo, l\u00e1seres ns), la contribuci\u00f3n IRF procede principalmente de la anchura del pulso, cuando el tiempo de fluctuaci\u00f3n es mucho mayor que la anchura del pulso l\u00e1ser (por ejemplo, l\u00e1seres fs), la contribuci\u00f3n IRF procede principalmente de la fluctuaci\u00f3n, y cuando ambos est\u00e1n pr\u00f3ximos (por ejemplo, l\u00e1seres ps), es su efecto combinado.<\/p><p>En el caso de los detectores, tambi\u00e9n existen problemas de tiempo de respuesta del detector y de fluctuaci\u00f3n temporal de la se\u00f1al el\u00e9ctrica similares a los descritos anteriormente (como se muestra en la Figura 5). Cuando el detector detecta un fot\u00f3n, emite una se\u00f1al de impulso el\u00e9ctrico correspondiente, cuyo flanco ascendente representa el tiempo de respuesta (tiempo transitorio) del detector; en la detecci\u00f3n TCSPC, se establece un umbral de se\u00f1al (TH) para discriminar entre impulsos el\u00e9ctricos v\u00e1lidos, que luego son registrados con precisi\u00f3n por un discriminador de fracci\u00f3n constante discriminador para registrar el tiempo exacto de llegada de los fotones al detector, independientemente de las fluctuaciones de intensidad. El tiempo de tr\u00e1nsito del detector en s\u00ed no contribuye en principio al IRF del instrumento, sin embargo, durante la detecci\u00f3n repetitiva de fotones, para aquellos fotones que llegan al detector incluso en el mismo momento, se produce una distribuci\u00f3n temporal y una desviaci\u00f3n de la se\u00f1al el\u00e9ctrica de salida entre s\u00ed, es decir, una dispersi\u00f3n temporal transitoria (v\u00e9ase la Fig. 5), lo que da lugar a un jitter temporal en el detector. jitter), que contribuye a la IRF de todo el sistema.<\/p><p><strong><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26430\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-11.png\" alt=\"\" width=\"831\" height=\"258\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-11.png 831w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-11-300x93.png 300w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-11-768x238.png 768w\" sizes=\"(max-width: 831px) 100vw, 831px\" \/><\/strong><\/p><p>Figura 5. Contribuci\u00f3n de la fluctuaci\u00f3n temporal del detector al IRF. El detector detecta el fot\u00f3n y genera una se\u00f1al el\u00e9ctrica pulsada, y el momento en que el fot\u00f3n alcanza la detecci\u00f3n viene determinado por un umbral de se\u00f1al el\u00e9ctrica establecido. La fluctuaci\u00f3n temporal de la se\u00f1al el\u00e9ctrica de la se\u00f1al de telecomunicaci\u00f3n se debe entonces a la presencia del desdoblamiento del tiempo de transici\u00f3n (fluctuaci\u00f3n)<\/p><p>En la actualidad, los detectores como los detectores de fot\u00f3n \u00fanico y los PMT se utilizan principalmente en la instrumentaci\u00f3n comercial, donde la mayor\u00eda de las fluctuaciones de los detectores de fot\u00f3n \u00fanico pueden alcanzar normalmente menos de 100 ps, mientras que los detectores PMT convencionales pueden alcanzar fluctuaciones de 1-2 ns, y los PMT especiales de placa de microcanal (MCP) o los PMT h\u00edbridos pueden alcanzar menos de 100 ps. Por lo tanto, en opini\u00f3n del autor, cuando el sistema utilice detectores PMT convencionales, s\u00f3lo ser\u00e1 adecuado para la detecci\u00f3n de muestras de mayor tiempo de vida de la fluorescencia.<\/p><p>De ello se deduce que el IRF global de un sistema de tiempo de vida de fluorescencia consta de un l\u00e1ser y un detector, cuyo valor puede determinarse mediante la siguiente ecuaci\u00f3n te\u00f3rica:<\/p><p><strong><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26431\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-12.png\" alt=\"\" width=\"409\" height=\"72\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-12.png 409w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-12-300x53.png 300w\" sizes=\"(max-width: 409px) 100vw, 409px\" \/><\/strong><\/p><p>El IRF del sistema de detecci\u00f3n de fluorescencia utilizado en el experimento puede obtenerse detectando directamente la se\u00f1al de dispersi\u00f3n del l\u00e1ser, como se muestra en la figura 6. el valor de IRF puede definirse como el valor FWHM de la curva IRF medida. un valor de IRF menor representa una mayor resoluci\u00f3n temporal del instrumento.<\/p><p><strong><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26432\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-13.png\" alt=\"\" width=\"432\" height=\"374\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-13.png 432w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-13-300x260.png 300w\" sizes=\"(max-width: 432px) 100vw, 432px\" \/><\/strong><\/p><p>Figura 6. IRF del sistema detector de vida de fluorescencia<\/p><p>Por lo tanto, la curva de tiempo de vida de fluorescencia que medimos en nuestro experimento es el resultado de la convoluci\u00f3n (resoluci\u00f3n) del IRF con la se\u00f1al de fluorescencia (Figura 7a). **Dado que el IRF determina directamente la resoluci\u00f3n temporal de la detecci\u00f3n del tiempo de fluorescencia, su tama\u00f1o tiene un gran impacto en los resultados y el an\u00e1lisis de la adquisici\u00f3n del tiempo de fluorescencia. **Antes de la operaci\u00f3n experimental, es necesario juzgar si el tama\u00f1o del IRF del dispositivo es adecuado para medir el tiempo de vida de fluorescencia de la muestra examinada. Como se muestra en la Figura 7b, para la misma muestra, un dispositivo con un IRF peque\u00f1o mostrar\u00e1 un proceso de flanco ascendente m\u00e1s r\u00e1pido y agudo, mientras que un dispositivo con un IRF m\u00e1s grande mostrar\u00e1 un proceso de flanco ascendente m\u00e1s lento y suave. Si el proceso de decaimiento del tiempo de vida de la fluorescencia contiene un componente de decaimiento r\u00e1pido, s\u00f3lo un dispositivo con un IRF peque\u00f1o puede captar eficazmente el componente r\u00e1pido (IRF menor que el tiempo de vida del componente r\u00e1pido), sin embargo, un dispositivo con un IRF grande, debido a las limitaciones de resoluci\u00f3n temporal, es probable que no detecte la presencia del componente de decaimiento r\u00e1pido (por ejemplo, si el IRF es mucho mayor que el tiempo de vida del componente de decaimiento r\u00e1pido), lo que da lugar a un sesgo significativo en el an\u00e1lisis. Esto puede causar un sesgo significativo en el an\u00e1lisis de los resultados. Por ejemplo, es habitual determinar la concentraci\u00f3n de estados defectuosos en una muestra examinando el tiempo de vida de la fluorescencia. Una alta concentraci\u00f3n de estados defectuosos en una muestra dar\u00e1 lugar a un r\u00e1pido decaimiento del tiempo de vida de fluorescencia, y si la fluorescencia se recoge con un dispositivo con un IRF grande, es probable que no se consiga la detecci\u00f3n del posible proceso de decaimiento r\u00e1pido, lo que dar\u00e1 lugar a una determinaci\u00f3n incorrecta de la concentraci\u00f3n de estados defectuosos en la muestra. Adem\u00e1s, procesos como la transferencia de carga y la transferencia de energ\u00eda en las muestras, as\u00ed como determinadas mol\u00e9culas y materiales semiconductores, tambi\u00e9n pueden generar o tener procesos de decaimiento r\u00e1pido de la fluorescencia, y los estudios cin\u00e9ticos de fluorescencia de dichos procesos y materiales tambi\u00e9n deben llevarse a cabo utilizando equipos de detecci\u00f3n de la vida \u00fatil de la fluorescencia con un IRF peque\u00f1o.<\/p><p><strong><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26433\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-14.png\" alt=\"\" width=\"1080\" height=\"307\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-14.png 1080w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-14-300x85.png 300w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-14-1024x291.png 1024w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-14-768x218.png 768w\" sizes=\"(max-width: 1080px) 100vw, 1080px\" \/><\/strong><\/p><p>Figura 7. a) La curva del tiempo de vida de la fluorescencia medida en el experimento es el resultado de la convoluci\u00f3n del IRF con la se\u00f1al de fluorescencia. b) El efecto del tama\u00f1o del IRF en la curva del tiempo de vida de la fluorescencia. los dispositivos con un IRF grande, limitados por la resoluci\u00f3n temporal, pueden no ser capaces de detectar el componente r\u00e1pido del decaimiento del tiempo de vida de la fluorescencia.<\/p><p>Para las muestras con tiempos de vida de fluorescencia inferiores al IRF, podemos extraer el tiempo de vida de fluorescencia mediante de-convoluci\u00f3n en el ajuste de datos. Mediante simulaciones, hemos descubierto que la de-convoluci\u00f3n puede extraer con precisi\u00f3n los tiempos de vida de fluorescencia hasta IRF\/5 (por ejemplo, IRF = 200 ps, la de-convoluci\u00f3n puede ajustarse tan r\u00e1pido como ~40 ps). Actualmente, algunos fabricantes de instrumentos comerciales fijan el l\u00edmite de extrapolaci\u00f3n de la deconvoluci\u00f3n en IRF\/10 y lo definen como la resoluci\u00f3n temporal del instrumento, lo cual me parece exagerado e inexacto. Al fin y al cabo, los resultados de la deconvoluci\u00f3n se derivan de m\u00e9todos matem\u00e1ticos m\u00e1s que de una detecci\u00f3n precisa, y s\u00f3lo pueden dar una estimaci\u00f3n aproximada de los tiempos de vida de fluorescencia inferiores a IRF. Deber\u00eda conseguirse una detecci\u00f3n m\u00e1s precisa utilizando equipos de detecci\u00f3n con mayor resoluci\u00f3n temporal, como la upconversi\u00f3n de fluorescencia ultrarr\u00e1pida y las c\u00e1maras streak ultrarr\u00e1pidas.<\/p><p>Adem\u00e1s, hay que volver a insistir en que la resoluci\u00f3n temporal de la t\u00e9cnica de detecci\u00f3n del tiempo de vida de la fluorescencia viene determinada por el tiempo IRF del sistema en su conjunto, no por el tiempo bin de la curva del tiempo de vida de la fluorescencia (\u2206t en la Figura 1) ni por la precisi\u00f3n de microtemporizaci\u00f3n de la tarjeta TCSPC. **Dado que el IRF del l\u00e1ser y del detector suele ser mucho mayor que la precisi\u00f3n de temporizaci\u00f3n del TCSPC, el IRF del sistema en su conjunto est\u00e1 limitado por el l\u00e1ser y el detector.<\/p><p>En la actualidad, existen en el mercado dispositivos de detecci\u00f3n de la vida \u00fatil de la fluorescencia con distintas configuraciones, como diferentes l\u00e1seres y detectores.<strong>En resumen, para el par\u00e1metro de resoluci\u00f3n temporal, debemos centrarnos en los siguientes puntos a la hora de elegir la configuraci\u00f3n de un instrumento:<\/strong><\/p><ul><li>\u00bfCu\u00e1l es la anchura de pulso del l\u00e1ser<\/li><li>tiempo de fluctuaci\u00f3n de la se\u00f1al de sincronizaci\u00f3n l\u00e1ser<\/li><li>Tiempo de fluctuaci\u00f3n del detector<\/li><li>Informaci\u00f3n sobre la precisi\u00f3n de temporizaci\u00f3n de la tarjeta TCSPC y el n\u00famero de canales<\/li><\/ul><p>El IRF final del sistema ser\u00e1 mayor o igual que el valor de tiempo m\u00e1ximo en los par\u00e1metros anteriores.<\/p><p><strong>2) Ventana temporal de detecci\u00f3n y frecuencia del l\u00e1ser<\/strong><\/p><p>El intervalo de la ventana temporal en la detecci\u00f3n del tiempo de vida de la fluorescencia TCSPC depende principalmente de la refrecuencia l\u00e1ser, siendo el tiempo m\u00e1ximo de la ventana temporal el tiempo de ciclo de la refrecuencia l\u00e1ser T. Sin embargo, debido al retardo en la transmisi\u00f3n de la se\u00f1al el\u00e9ctrica que se muestra en la Figura 3, parte del intervalo de la ventana temporal est\u00e1 ocupado por el tiempo de retardo. En t\u00e9rminos generales, el intervalo de la ventana de tiempo debe elegirse para que sea al menos 2-3 veces mayor que el tiempo de vida de la fluorescencia, por lo que es necesario elegir la refrecuencia l\u00e1ser adecuada y ajustar el retardo de la se\u00f1al el\u00e9ctrica, etc., de acuerdo con el tiempo de vida de la fluorescencia de la muestra. Adem\u00e1s, si el TCSPC determina el tiempo bin (\u2206t) de la curva de tiempo de vida de fluorescencia dividiendo el n\u00famero de canales por el rango de la ventana de tiempo, una ventana de tiempo grande aumentar\u00e1 el valor del tiempo bin (por ejemplo, \u2206t \u2248 o &gt; IRF) y dar\u00e1 lugar a una reducci\u00f3n de la resoluci\u00f3n temporal del sistema.<\/p><p>Por otro lado, para el m\u00e9todo de adquisici\u00f3n de recuento de fotones individuales TCSPC, utilizar un l\u00e1ser con una refrecuencia demasiado baja significa que se adquieren menos fotones por unidad de tiempo, lo que reducir\u00e1 seriamente la eficacia de la adquisici\u00f3n de la curva de tiempo de vida de fluorescencia, as\u00ed como la relaci\u00f3n se\u00f1al\/ruido.<\/p><p>\u00a0<\/p><p>04<strong>Presentaci\u00f3n correcta de las curvas de vida de fluorescencia<\/strong><\/p><p>Como se ha mencionado anteriormente, una curva completa de vida de fluorescencia debe incluir un flanco ascendente y un flanco descendente. Ambos componentes son f\u00edsicamente significativos. Es com\u00fan ver en la literatura ciertas presentaciones de datos de tiempo de vida de fluorescencia que omiten el componente del flanco ascendente, lo cual es inherentemente un enfoque incorrecto. El flanco ascendente representa el proceso de generaci\u00f3n del estado excitado en la muestra, y para las especies luminiscentes directamente excitadas puede reflejar el tama\u00f1o del IRF en el momento de la detecci\u00f3n, y puede utilizarse para determinar si a la curva de tiempo de vida de fluorescencia le falta un componente de decaimiento r\u00e1pido, o para observar procesos como la transferencia de energ\u00eda (u otros procesos de generaci\u00f3n del estado excitado) en algunas muestras, como se muestra en la Figura 8, y por lo tanto debe prest\u00e1rsele la debida atenci\u00f3n. Por supuesto, si el tiempo de vida de la fluorescencia es mucho mayor que el IRF o si el proceso r\u00e1pido no es de inter\u00e9s, es posible ignorar el flanco ascendente en este punto. Adem\u00e1s, es necesario tener en cuenta el IRF en el ajuste de la curva de tiempo de vida de fluorescencia (especialmente cuando el tiempo de vida de fluorescencia es corto) para obtener resultados de ajuste del tiempo de vida de fluorescencia m\u00e1s precisos.<\/p><p><strong><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone size-full wp-image-26434\" src=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-15.png\" alt=\"\" width=\"577\" height=\"444\" srcset=\"https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-15.png 577w, https:\/\/www.accscicn.com\/wp-content\/uploads\/2022\/05\/640-15-300x231.png 300w\" sizes=\"(max-width: 577px) 100vw, 577px\" \/><\/strong><\/p><p>Figura 8. La cin\u00e9tica de la transferencia de energ\u00eda puede determinarse recogiendo las curvas de vida de fluorescencia de ambos durante la transferencia de energ\u00eda de resonancia donante-aceptante. Si el tiempo de transferencia de energ\u00eda &gt; IRF, la curva de tiempo de vida de fluorescencia del aceptor muestra un borde ascendente m\u00e1s lento que el IRF, acompa\u00f1ado de un r\u00e1pido decaimiento de la fluorescencia del donante.<\/p><p>Fuente: Tristar Spectrum @ WeChat<br \/>CU\u00c1NDO:<em>2022-04-19<\/em><\/p>\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-column elementor-col-50 elementor-inner-column elementor-element elementor-element-75b1765f\" data-id=\"75b1765f\" data-element_type=\"column\">\n\t\t\t<div class=\"elementor-widget-wrap elementor-element-populated\">\n\t\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-element elementor-element-571ddd57 elementor-widget-divider--view-line elementor-widget elementor-widget-divider\" data-id=\"571ddd57\" data-element_type=\"widget\" data-widget_type=\"divider.default\">\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-widget-container\">\n\t\t\t<style>\/*! elementor - v3.21.0 - 20-05-2024 *\/\n.elementor-widget-divider{--divider-border-style:none;--divider-border-width:1px;--divider-color:#0c0d0e;--divider-icon-size:20px;--divider-element-spacing:10px;--divider-pattern-height:24px;--divider-pattern-size:20px;--divider-pattern-url:none;--divider-pattern-repeat:repeat-x}.elementor-widget-divider .elementor-divider{display:flex}.elementor-widget-divider .elementor-divider__text{font-size:15px;line-height:1;max-width:95%}.elementor-widget-divider .elementor-divider__element{margin:0 var(--divider-element-spacing);flex-shrink:0}.elementor-widget-divider .elementor-icon{font-size:var(--divider-icon-size)}.elementor-widget-divider .elementor-divider-separator{display:flex;margin:0;direction:ltr}.elementor-widget-divider--view-line_icon .elementor-divider-separator,.elementor-widget-divider--view-line_text .elementor-divider-separator{align-items:center}.elementor-widget-divider--view-line_icon .elementor-divider-separator:after,.elementor-widget-divider--view-line_icon 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href=\"https:\/\/www.accscicn.com\/es\/producto\/sistema_de_imagen_fluorescente\/\" >\n\t\t\t\tSistema de formaci\u00f3n de im\u00e1genes de fluorescencia (intensidad) con barrido l\u00e1ser para dispositivos optoelectr\u00f3nicos\t\t\t<\/a>\n\t\t<\/h3>\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-post__excerpt\">\n\t\t\t<p>\u9499\u949b\u77ff\u8f7d\u6d41\u5b50\u52a8\u529b\u5b66\u5206\u6790* \u6fc0\u5149\u626b\u63cf\u8367\u5149\u5bff<\/p>\n\t\t<\/div>\n\t\t\n\t\t<a class=\"elementor-post__read-more\" href=\"https:\/\/www.accscicn.com\/es\/producto\/sistema_de_imagen_fluorescente\/\" aria-label=\"M\u00e1s informaci\u00f3n sobre Optoelectronic device laser scanning fluorescence lifetime (intensity) imaging system\" tabindex=\"-1\" >\n\t\t\tLeer M\u00e1s \"\t\t<\/a>\n\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/article>\n\t\t\t\t<article class=\"elementor-post elementor-grid-item post-25818 page type-page status-publish hentry category-product category-photovoltaic tag-timetechspectra-mfemto-um100 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