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L'altération des connexions synaptiques est associée à presque toutes les maladies du cerveau. La perte de synapses est un problème particulièrement grave dans les maladies cérébrales qui perturbent les fonctions cognitives, telles que la schizophrénie et la maladie d'Alzheimer. Des plates-formes de criblage à haut contenu, basées sur les neurones primaires, ont été développées dans le cadre d'un programme de recherche visant à découvrir de nouveaux mécanismes qui déclenchent une augmentation du nombre de connexions neuronales comme stratégie de lutte contre ces maladies, ainsi qu'à faciliter le développement de nouvelles sondes chimiques qui déclenchent une augmentation du nombre de connexions synaptiques. Ces sondes serviront de plateforme pour le développement de futures générations de médicaments pour le traitement de diverses maladies du cerveau.

Dans le cadre d'une plateforme de criblage à haut contenu, pour garantir des résultats reproductibles d'un lot à l'autre, il est important de s'assurer que toutes les cellules sont inoculées de manière cohérente et que l'activité cellulaire est maintenue pendant toute la durée de l'expérience. Cette note d'application décrit une procédure expérimentale qui met en évidence l'applicabilité du processeur liquide MANTIS® en tant que solution précise, fiable et robuste pour la distribution de cellules neuronales primaires, même les plus sensibles.

fabrication

1x microplaque Aurora 1536 puits avec revêtement PDL

50 ml de milieu contenant

- 1X milieu Neurobasal-A
- 2,5% Glutamax-I
- 02% Réactif à la gentamicine
- 2% B-27 Suppléments
- 10 uM FUDR

5 × 106 cellules corticales primaires extraites de souriceaux P0

Processeur de liquide FORMULATRIX® MANTIS

Centrifugeuse Eppendorf 5810 R

Plate-forme d'imagerie confocale à base de laser GE IN Cell Analyzer 6000

les méthodologies

1. Les cellules neuronales ont été inoculées dans des plaques de microtitration Aurora à 1536 puits.
2. Distribuer 15 μL de milieu contenant 3 x 103 cellules dans chacun des 1536 puits.
3. Centrifuger la plaque à 200 g pendant 1 minute.
4. Les cellules ont été cultivées sans alimentation pendant 7 jours
5. Comptage des cellules par contraste de phase DIV7 à l'aide de l'IN Cell Analyzer 6000

à la fin

Après 7 jours d'incubation, le nombre moyen de cellules en phase était comparable à celui des plaques à 96 ou 384 puits, avec un CV pour l'uniformité du nombre de cellules inférieur à 10% sur la plaque à 1536 puits.

Figure 1 : Cellules neuronales primaires dans un seul puits d'une microplaque Aurora de 1536 puits.

résumés

Le Formulatrix MANTIS distribue les cellules de manière cohérente, même dans de petits volumes de plaques à 1536 puits. De plus, en utilisant une technique de distribution douce et à faible cisaillement, l'instrument prolonge l'activité cellulaire in vitro.

une note de remerciement

Ce travail a été réalisé par Chris Hubbs du Scripps Research Institute à Jupiter, en Floride. Le Scripps Research Institute (TSRI) - l'un des plus grands organismes de recherche privés à but non lucratif du monde - est à la pointe de la science biomédicale fondamentale et constitue un élément essentiel de la recherche médicale visant à comprendre les processus les plus fondamentaux de la vie. Au cours des dernières décennies, l'Institut a contribué de manière significative à l'amélioration de la santé et de la condition humaine.