Dépistage automatisé et reproductible des anticorps HLA dans les transplantations d'organes à l'aide du distributeur MANTIS

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Le système des antigènes leucocytaires humains (HLA) fait partie de notre système immunitaire adaptatif et joue un rôle important dans la défense contre les maladies et la transplantation d'organes. Les donneurs dont les marqueurs HLA correspondent à ceux du receveur sont moins susceptibles de rejeter l'organe.

Des chercheurs du Laboratoire d'immunologie médicale (LMI) du Centre médical de l'Université Radboud, aux Pays-Bas, recherchent des anticorps spécifiques HLA dans le sérum de receveurs d'organes potentiels. La détection des anticorps contre les marqueurs HLA est nécessaire pour éviter le rejet suraigu des organes des donneurs. Le rejet peut être causé par une transfusion sanguine, une transplantation ou une grossesse. Le laboratoire effectue des tests trimestriels pour détecter ces anticorps nocifs dans le sérum des patients.

Ces anticorps peuvent être détectés en croisant le sérum d'un patient avec plus de 60 suspensions de lymphocytes uniques provenant de différents individus ayant des marqueurs HLA différents. Ce test est également appelé test de cytotoxicité dépendante du complément (CDC).

Dans cette étude, le MANTIS® Liquid Processor de FORMULATRIX® a été utilisé pour répartir les lymphocytes isolés dans des plaques Terasaki préparées.

Matériels et méthodes

Tout d'abord, 1 μl de sérum de patient a été distribué dans des plaques Terasaki (Greiner) à l'aide d'un distributeur de sérum ART Robbins (Sunnyvale, CA). Les lymphocytes du donneur ont été isolés du sang à l'aide d'un gradient de densité Lymphoprep (Elitech Group) ou de méthodes à l'azote liquide, puis cultivés et lavés avec le colorant CFDA C195 (Invitrogen). Une suspension de lymphocytes de 4 x 106 cellules par ml est ensuite préparée.

Le distributeur MANTIS® a été utilisé pour distribuer 1 μL de lymphocytes isolés dans des plaques Terasaki préparées. Les étapes suivantes comprenaient l'ajout de complément de lapin (Immucore, Norcross, GA) et d'une suspension d'EDTA (Merck, KGaA, Darmstadt, Allemagne), d'hémoglobine et d'iodure de propidium, ainsi que l'incubation.

Après la dernière étape d'addition, la plaque de microtitration a été observée au microscope inversé à fluorescence (Leitz Leica Diavert Inverted Microscope with fluorescent light illuminator (480-525nm) Oculair 10x) pour déterminer s'il y avait une réaction positive ou négative entre le sérum du patient et les lymphocytes du donneur. la présence d'une réaction positive ou négative entre le sérum du patient et les lymphocytes du donneur.

La mesure du pourcentage d'élimination (% kill) est déterminée à partir des résultats de la coloration fluorescente (voir figure 1). Le pourcentage de destruction est le pourcentage de cellules positives (rouges) par rapport au nombre total de cellules positives et négatives (vertes). Les résultats en pourcentage sont indiqués dans le tableau 1.

Tableau 1 : Pourcentage des scores d'abattage

Figure 1 : Échantillon de lymphocytes clairement visible (A) Réaction négative, en vert. (B) Réaction positive, rouge. (C) Réaction positive forte, rouge.

Résultats et conclusions

Étant donné que l'équipement existant n'est plus pris en charge, les laboratoires doivent trouver un autre distributeur automatisé pour ajouter les lymphocytes préparés aux plaques Terasaki. La distribution manuelle introduit une certaine variabilité au cours de l'expérience, ce qui est inacceptable pour le chercheur.

Un nombre croissant de laboratoires utilisant des équipements qui ne sont plus pris en charge pour le dépistage HLA devront remplacer cette technologie obsolète. L'équipe de l'IMT a donc accepté de partager les résultats de son évaluation au profit de l'ensemble de la communauté universitaire impliquée dans ce travail important.

L'instrument MANTIS de FORMULATRIX est reconnu comme une technique supérieure pour l'ajout de lymphocytes par rapport à l'ajout manuel à la pipette et a été utilisé avec succès dans les flux de travail de routine des laboratoires. Il permet d'obtenir des résultats en moins de temps et avec plus de cohérence et de précision.

Remerciements et remerciements

FORMULATRIX® tient à remercier Yvonne van Berkel (analyste senior Cellulaire Immunologie et Histocompatibiliteit) et l'équipe LMI pour leur travail d'évaluation du flux de travail HLA du distributeur MANTIS® et pour les résultats fournis dans cette note d'application. Les membres de l'équipe ont également participé à la description des résultats des données fournis dans cette note d'application. Les autres membres de l'équipe étaient Siham Akdimi, Gaby Derksen, Suzanne Hendriks et Jeroen Slager.

Source : @BostonFummerle

Heure : 2022.02.21