MANTIS® Liquid Processorを用いた高粘度プライマリーニューロンベーススクリーニングプラットフォームにおける細胞の分注について
プレゼンテーション
シナプス結合の変化は、ほとんどすべての脳疾患に関連している。特に、シナプスの減少は、統合失調症やアルツハイマー病のような認知機能を障害する脳疾患において特に深刻な問題である。これらの疾患と闘うための戦略として、神経結合の増加を引き起こす新たなメカニズムを発見し、シナプス結合の増加を引き起こす新たな化学プローブの開発を促進することを目的とした研究プログラムの一環として、高含量の一次ニューロンベースのスクリーニング・プラットフォームが開発された。これらのプローブは、様々な脳疾患の治療のための将来世代の薬剤開発のためのプラットフォームとなる。
ハイコンテントスクリーニングプラットフォームの一部として、バッチ間で再現性のある結果を保証するためには、すべての細胞が一貫して接種され、実験期間中細胞の活性が維持されることを保証することが重要です。このアプリケーションノートでは、MANTIS® Liquid Processorが、最も敏感な初代神経細胞でさえも分注できる、精密で信頼性が高く、堅牢なソリューションであることを強調する実験手順について説明します。
メイク
1x PDLコート1536ウェルオーロラマイクロプレート
50mLの培地。
- 1X ニューロバサルA培地
- 2.5% グルタマックス-I
- 02% ゲンタマイシン試薬
- 2% B-27 サプリメント
- 10 uM FUDR
P0仔マウスから抽出した5×106個の初代皮質細胞
FORMULATRIX® MANTIS リキッドプロセッサー
エッペンドルフ5810 R遠心分離機
GE IN セルアナライザー 6000 レーザーベース共焦点イメージングプラットフォーム
方法論
- 神経細胞を1536ウェルのオーロラ・マイクロタイター・プレートに接種した。
- 3×103個の細胞を含む培地15μLを、1536個の各ウェルに分注します。
- プレートを 200 g で 1 分間遠心する。
- 細胞は7日間無給餌で培養した。
- INセルアナライザー6000を用いたDIV7位相コントラストによる細胞計数
結局
培養7日後、平均位相細胞数は96ウェルプレートまたは384ウェルプレートと同等で、1536ウェルプレート全体の細胞数の均一性のCVは10%未満であった。
図1.1536ウェルオーロラマイクロプレートの単一ウェル内の初代神経細胞。
概要
Formulatrix MANTISは、1536ウェルプレートの少量分注でも一貫して細胞を分注します。さらに、穏やかな低せん断分注技術を使用することで、in vitroでの細胞活性を長持ちさせます。
礼状
この研究は、フロリダ州ジュピターにあるスクリップス研究所のクリス・ハッブスによるものである。スクリプス研究所(TSRI)は、世界最大級の非営利民間研究機関であり、基礎生物医学の最前線に立ち、生命の最も基本的なプロセスの解明を目指す医学研究に不可欠な存在である。過去数十年にわたり、当研究所は健康と人間状態の改善に大きく貢献してきた。